765.隐蔽、狡猾、善变 (第2/2页)

展而稳步增加，从接种后第一周肿瘤浸润淋巴细胞的不到10%上升到第四周超过20%从在LLC细胞接种后的第一周386.8±100.9逐渐增加到第四周的1，068.0±121.8，而与辐照小鼠进行比较抗Ly-6G抗体处理后的PD-1表达没有变化小鼠。因此，在这部分我们建议PMN-MDSCs通过抑制CD8 T细胞促进放疗后肿瘤的再生。PMN-MDSCs不仅抑制了TME中CD8 T细胞的数量，而且还抑制了其活性。

    为了确定辐照诱导MDSCs的抑制机制，我们进行了免疫组化染色及iNOS和ARG1活性检测。肿瘤切片的免疫组化染色显示，局部RT增强了ARG1的表达，但没有增强iNOS的表达。ARG1活性测定表明，局部照射显著提高了ARG1的活性，从0.400.15U/L提高到3.780.39U/L((P<>

    PD-L1的表达是MDSCs的一种新型免疫抑制机制。然后我们询问PD-L1上调是否是RT后MDSCs介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后MDSC中PD-L1的表达。图4E显示，与未处理组相比，受照射肿瘤的MDSC中的PD-L1表达在照射后不久显着增加（照射后第三天：ctrlvs.RT=443.9±175.3auvs.1328.0±324.3au，P<><>

    以上数据表明ARG1表达的上调是照射后PMN-MDSCs抑制功能的合理机制。然而，不涉及PD-L1和iNOS的调节。为了进一步证实这一假设，在辐射后通过灌胃给予ARG1抑制剂nor-NOHA。10mg/kg/dnor-NOHA有效地将ARG1活性从3.780.39U/L降低到2.020.25U/L（P<>

    RT后给予nor-NOHA显着增加CD8 T细胞比例（RTvs.RT nor-NOHA=2.420.62%vs.6.140.64，P<>

    我们的结果表明，RT通过上调肿瘤内PMN-MDSC的百分比和ARG1活性来促进肿瘤免疫逃避。推测抑制PMN-MDSCs及其ARG1活性可能是一种新的抗肿瘤策略是合理的。越来越多的证据表明，PDE5抑制剂可以抑制TB小鼠和癌症患者MDSC中iNOS和ARG1的活性和表达。因此，通过灌胃给予西地那非20mg/kg/d，以研究它是否可以促进RT的抗肿瘤作用并阐明潜在机制。如图5B所示，正如我们预期的那样，西地那非延迟了照射后的肿瘤再生长，这与阳性对照Nor-NOHA相当。TME的免疫特征表明，当给予西地那非时，肿瘤内PMN-MDSC的比例从38.66±4.24%下降到23.57±2.38%。

    此外，西地那非也显着降低了ARG1的表达。为了进一步检查西地那非对MDSC的抑制是否真的导致抗肿瘤免疫增强，我们分析了肿瘤内CD8 T细胞的比例和活性。流式细胞术分析表明CD8 T细胞的百分比从2.42±0.62%增加到7.21±1.22%。

    此外，当给予西地那非时，CD8 T细胞分泌的IFN-γ也显着升高。因此，我们证实PDE5抑制剂西地那非通过调节PMN-MDSCs改善了照射后肿瘤免疫微环境。西地那非联合放疗可能是提高放疗疗效的一种有前景的策略。

    工作揭示了PMN-MDSCs中ARG1通路介导RT后肿瘤再生的新机制，如图6所示。我们认为，PMN-MDSCs是辐照招募的主要亚型，而不是M-MDSCs。在广泛的免疫抑制机制中，ARG1的上调和激活是PMN-MDSCs在放疗后抑制CD8 T细胞的主要机制。为了克服PMN-MDSCs引起的免疫抑制，我们提出并证明，sildenafil和RT联合使用降低了PMN-MDSCs在TME内的募集和免疫抑制作用，激活了CD8 T细胞应答，导致肿瘤生长延迟。综上所述，我们的研究结果为缓解免疫抑制TME以提高RT治疗效果提供了一种新的解决方案。虽然所有这些结果都是在LLC小鼠模型中进行的，但同样的机制是否适用于其他肿瘤模型尚不清楚。此外，在不同的辐射方案下，MDSCs及其亚型如何影响TME仍未确定。因此，这些问题还需要进一步的研究来解决。

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